24 đội của MLS được chia thành hai Liên đoàn phía Đông và phía Tây. Mỗi câu lạc bộ được phép sở hữu lên tới 28 cầu thủ trong danh sách đội hình ban đầu.[33] Tất cả 28 cầu thủ đều có thể được chọn vào các đội hình 18 người cho từng trận đấu trong mùa giải chính và vòng playoff.

Kể từ mùa giải 2005, MLS đã bổ sung thêm nhiều câu lạc bộ mới. Trong thời gian mở rộng này, Los Angeles trở thành nơi đầu tiên có hai đội, và giải đấu còn được mở rộng sang Canada vào năm 2007.[34] Giải đã mở rộng từ 18 đội vào năm 2014 lên thành 23 vào năm 2018. Vào năm 2019, giải sẽ bổ sung thêm đội thứ 24, Cincinnati.[35] Giải có kế hoạch mở rộng lên 26 đội với sự tham dự của các đội ở Miami và Nashville vào năm 2020,[36] thậm chí còn dự định mở rộng lên 28 đội tới năm 2022.

Một vài đội còn tranh tài hằng năm cho chiếc cúp cạnh tranh MLS phụ, thường là bởi hai đối thủ trong cùng khu vực (vd. Portland với Seattle hoặc Vancouver).[37] Mỗi chiếc cúp được trao cho đội có thành tích mùa giải chính thức cao hơn đội kia ở các trận đấu có hai đội tham gia. Khái niệm này tương tự như những danh hiệu nhỏ của các đội bóng bầu dục Mỹ đại học.[38]

Hiện tại

Tương lai

Cũ

Thời biểu

Thành viên giải Thành viên cũ Thành viên trong tương lai Các giải khác